El primer asentamiento europeo en los actuales Estados Unidos continentales no fue el conocido fuerte de Jamestown, fundado en 1607, sino San Miguel de Guadalupe, fundado en 1526 por el explorador castellano Lucas Vázquez de Ayllón.
En julio de 1526, Vázquez de Ayllón y sus hasta 600 tripulantes organizaron una expedición formada por seis barcos que exploraría las costas de las Carolinas con el fin de fundar un asentamiento estable en la zona y comenzar a adentrarse tierra adentro. Desde la isla caribeña de La Española (hoy la República Dominicana y Haití) partieron hacia el este de EEUU, explorando las costas de Georgia, Carolina del Sur y Carolina del Norte. Las últimas investigaciones realizadas sobre el viaje de Vázquez de Ayllón afirman que desembarcaron en la parte continental de Georgia, en lo que hoy es el condado de McIntosh y allí fundaron el asentamiento de San Miguel de Gualdape: el primer asentamiento europeo en América del Norte. No obstante, otros investigadores sostienen que, según testimonios escritos de los años posteriores a la expedición del adelantado, el explorador habría establecido el asentamiento de San Miguel de Guadalupe más al norte, en la bahía de Chesapeake, dándole el nombre de bahía de Santa María, como se puede ver en un mapa de 1529 de Diego Ribero.
Las razones de la falta de seguridad a la hora de determinar la localización exacta del asentamiento se deben a que Vázquez de Ayllón falleció durante el viaje, en octubre de 1526, lo que imposibilitó que dejara evidencias por escrito de sus descubrimientos. Además, las inclemencias del tiempo en la zona y la falta de alimentos obligaron a los 150 pobladores supervivientes a regresar a La Española, abandonando el asentamiento a los pocos meses de su fundación. No obstante, cabe recordar que la ciudad más antigua de EEUU sigue teniendo origen español: San Agustín, fundada en 1565 por Pedro Menéndez de Avilés.
